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Milieu pour auxanogramme du carbone

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L'auxanogramme du carbone est l'étude de la croissance d'une souche microbienne en présence d'une source de carbone unique et de facteurs de croissance. Le milieu utilisé est un milieu de culture synthétique.

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Usage

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Ce milieu de culture est entièrement synthétique, sa composition est exactement connue. Il ne contient pas de source de carbone (glucides, acides aminés…) autres que ceux étudiés. Il permet la détermination, par la culture, de l'auxanogramme du carbone de chaque molécule et d'obtenir la liste des sources de carbone que le microorganisme est capable d'utiliser pour sa croissance dans les conditions du milieu, c'est-à-dire avec les facteurs de croissance présents s'il est auxotrophe pour certains.

Un milieu permet d'apprécier la consommation d'une source de carbone comme seul substrat carboné, le milieu Citrate de Simmons, mais la culture impose au microorganisme de n'avoir besoin d'aucun facteur de croissance.

Il contient des éléments essentiels comme des acides aminés, des vitamines (facteurs de croissances) et des sources d'ions minéraux ce qui permet d'étudier un seul facteur limitant : la source de carbone étudiée.

Composition du milieu et du supplément

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composition du milieu

pour auxanogramme

qsp 1 L Solution oligoéléments

(proposée par l'ATCC)

qsp 1 L
L-histidine 10,0 µg EDTA 500 mg
DL-méthionine 20,0 µg MgSO4 . 7H2O 3000 mg
DL-tryptophane 20,0 µg MnSO4 . H2O 500 mg
Biotine 10,0 µg NaCl 1000 mg
Thiamine 1,0 µg FeSO4 . 7H2O 100 mg
Pyridoxine 1,0 µg Co(NO3)2 . 6H2O 100 mg
Pantothénate de calcium : 1,0 µg CaCl2 (anhydre) 100 mg
Acide nicotinique 1,0 µg ZnSO4 . 7H2O 100 mg
Inositol 10,0 µg CuSO4 . 5H2O 10 mg
Sulfate d'ammonium 500 mg AlK(SO4)2 (anhydre) 10 mg
Chlorure de calcium 100 mg H3BO3 10 mg
Chlorure de sodium 100 mg Na2MoO4 . 2H2O 10 mg
solution d'oligoéléments 1 mL Na2SeO3 (anhydre), 1 mg
Agar-agar 8 à 12 g Na2WO4 . 2H2O 10 mg
pH 5,6 NiCl2 . 6H2O 20 mg

Le supplément est la solution de Berthelot dont la composition est introuvable. Elle est remplacée ici par celle de l'ATCC (voir Bibliographie)

Le milieu complet peut avoir la composition suivante (selon Sigma - Alldrich) n'incluant pas tous les oligoéléments cités dans l'ATCC.

Composition milieu complet (Sigma) pour 1 L
Ammonium sulfate 5000 mg
L-histidine chlorhydrate 10 mg
DL-Méthionine 20 mg
DL-Tryptophane 20 mg
Biotine 2 µg
Panthoténate de calcium 0,4 mg
Acide folique 2 µg
Niacine 0,4 mg
Acide 4-aminobenzoïque 0,2 mg
Pyridoxine chlorhydrate 0,4 mg
Riboflavine 0,2 mg
Thiamine chlorhydrate 0,4 mg
Inositol 2 mg
Acide borique 0,5 mg
Sulfate de cuivre II 40 µg
Iodure de potassium 0,1 mg
Fer III chlorure 0,2 mg
Manganèse sulfate 0,4 mg
Molybdate de sodium 0,2 mg
Zinc sulfate 0,4 mg
Dihydrogénophosphate de potassium 1000 mg
Magnésium sulfate 500 mg
Chlorure de sodium 100 mg
Chlorure de calcium 100 mg
pH final à 25 °C 5,4 ± 0,2

Préparation

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Deux possibilités :

  • soit le milieu est solide et présenté en boîte de Petri. Après ensemencement, on place des disques de glucides ou d'autres sources de carbone à étudier. Observer alors la culture ou non autour du disque.
     
    Auxanogramme du carbone en boite de Petri par la méthode des disques - Pascal FRAPERIE
  • soit le milieu est semi-solide et utilisé dans les galeries API, les cupules de cette dernière contiennent les glucides ou d'autres sources de carbone à étudier. Observer alors la culture dans la cupule (en général dans la zone aérobie de la cupule pour la galerie API20NE).
     
    Galerie API 20NE - partie auxanogramme - Pascal FRAPERIE CAP = acide caprique (décanoïque) ADI = acide adipique MLT = acide malique CIT = acide citrique
    ou dans la galerie API20 C Aux destinée à l'identification des levures, ici Candida albicans :
     
    Candida albicans en galerie API20C Aux - S. Droguet

Lecture

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La présence d'une culture indique que le microorganisme est capable d'assimiler a source de carbone étudiée (glucide ou autre).

Voir aussi

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Bibliographie

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