Far-eastern blot
Le far-eastern blot est une technique de biologie moléculaire par transfert de molécules développée par T. Taki en 1994 [1],[2] pour analyser les lipides puis adaptée à d'autres molécules (métabolites, hormones, médicaments, etc.)
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Principe
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Dans un far-eastern blot, l'électrophorèse est remplacée par une chromatographie sur couche mince.
Cette technique se déroule en 3 étapes : la séparation des molécules à analyser, le transfert sur une membrane de PVDF puis la détection de ces molécules. Contrairement aux autres techniques de transfert qui utilisent préférentiellement l'électrophorèse comme méthode de séparation, le far-eastern blot utilise la chromatographie sur couche mince haute-performance, compatible avec les molécules hydrophobes ou non-ioniques. Après le transfert sur une membrane, plusieurs méthodes de détection peuvent être utilisées :
- des tests de liaison de ligands : on incube la membrane avec molécules marquées susceptibles d'interagir avec les molécules à analyser. On peut étudier ainsi l'interaction des lipides d'une membrane cellulaire avec différents types de ligands (anticorps, lectines, bactéries, virus, toxines, etc.) ou l'action d'enzymes sur une membrane cellulaire.
- l'identification directe par spectrométrie de masse[3], qui peut apporter des informations sur la structure des molécules à analyser.
Il est également possible d'utiliser cette technique sans séparation (technique du dot blot).
Notes et références
modifier- (en) Taki T., Handa S. and Ishikawa D., « Blotting of Glycolipids and Phospholipids from a High-Performance Thin-Layer Chromatogram to a Polyvinylidene Difluoride Membrane », Analytical Biochemistry, vol. 221, no 2, , p. 312-316 (lire en ligne)
- (en) Taki T., Kasama T., Handa S. and Ishikawa D., « A Simple and Quantitative Purification of Glycosphingolipids and Phospholipids by Thin-Layer Chromatography Blotting », Analytical Biochemistry, vol. 223, no 2, , p. 232-238 (lire en ligne)
- Taki T., Ishikawa D., Handa S. and Kasama T.
Direct Mass Spectrometric Analysis of Glycosphingolipid Transferred to a Polyvinylidene Difluoride Membrane by Thin-Layer Chromatography Blotting
Analytical Biochemistry Volume 225, Issue 1, February 1995, Pages 24-27
